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人白細胞分化抗原30(CD30)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-0017人白細胞分化抗原30(CD30)ELISA試劑盒
以下是人白細胞分化抗原30(CD30) ELISA試劑盒的規(guī)范使用說明，本生整合了多個品牌試劑盒的通用操作流程與注意事項：
一、試劑盒組成?
核心組分?
預(yù)包被抗CD30抗體的96孔酶標板(可拆分為48T/96T規(guī)格)?
凍干CD30標準品(濃度范圍：2.5–40 ng/L，需用標準品稀釋液復(fù)溶)?
生物素標記的抗CD30抗體(即用型)?
HRP標記的親和素(即用型)?
TMB底物液(A液與B液需混合使用)及終止液(2N H?SO?)?
輔助試劑?
洗滌緩沖液(20×濃縮液，需按1:20稀釋)?
樣本稀釋液(用于血清/血漿預(yù)處理)?
二、樣本處理要求?
采集與保存?
血清/血漿?：全血靜置10-20分鐘后離心(2000–3000 rpm，20分鐘)，取上清分裝于-20℃保存，避免反復(fù)凍融?。
細胞上清/組織勻漿?：離心去除顆粒物后檢測，高濃度樣本需稀釋至標準曲線范圍內(nèi)?。
注意事項?
避免使用含NaN?的保存液，以免HRP活性?。
細菌污染的樣本可能導(dǎo)致假陽性，需嚴格無菌操作?。
三、實驗步驟?
標準品制備?
凍干標準品按說明書復(fù)溶(如0.5mL樣本稀釋液溶解)，梯度稀釋至5個濃度點(如40、20、10、5、2.5 ng/L)?。
加樣與孵育?
每孔加入100μL標準品/樣本，37℃孵育90分鐘?。
洗滌3次后，加入100μL生物素標記抗體，37℃孵育60分鐘?。
再次洗滌，加入100μL HRP-親和素，37℃孵育30分鐘?。
顯色與終止?
每孔加入100μL TMB底物，避光顯色15–20分鐘(顏色由藍轉(zhuǎn)黃)?。
加入50μL終止液，顏色轉(zhuǎn)為黃色，10分鐘內(nèi)測定OD450nm值?。
四、結(jié)果計算?
以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制標準曲線，樣本濃度通過曲線方程計算?。
檢測靈敏度通?！?.0 ng/L，批內(nèi)CV≤15%?。
五、常見問題處理?
問題? ?可能原因? ?解決方案?
顯色過弱 孵育時間不足/抗體失活 延長孵育時間或更換新鮮試劑?
背景偏高 洗滌不充分/底物污染 增加洗滌次數(shù)或更換底物?
標準曲線異常 標準品稀釋錯誤 嚴格按梯度稀釋并短暫離心混勻?
六、注意事項?
試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷?。
操作時避免使用金屬器材接觸酶標板，防止靜電干擾?。
未用完的酶標板需密封保存于2–8℃，避免受潮?。
注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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